Определение группы крови по системе abo с помощью стандартных сывороток

Содержание
  1. Определение группы крови по системе АВО – важность процедуры и особенность методики
  2. Особенности классификации
  3. Почему нельзя ошибиться при исследовании
  4. Почему важно точно определять резус-фактор
  5. Определение групп с помощью цоликлонов
  6. Подготовка к манипуляциям
  7. Проведение процедуры
  8. Определение группы крови при помощи стандартных сывороток и цоликлонов
  9. Элементы кровяной системы
  10. Методы определения
  11. Лабораторные компоненты
  12. Определения группы крови с цоликлонами
  13. Определение сыворотками
  14. Переливание крови
  15. Переливание в зависимости от групп
  16. Редкость результатов
  17. Технические причины
  18. Экспресс-методика
  19. Правила определения группы крови по системе АВО
  20. Основные понятия
  21. История открытия
  22. Методика определения групп крови по системе АВО с помощью цоликлонов
  23. Экспресс-метод для резус-фактора
  24. Какие ошибки могут быть допущены при данной методике?
  25. Технические ошибки
  26. Ошибки биологической специфики
  27. Зависящие от особенностей эритроцитов
  28. Методы как определить группы крови (стандартными сыворотками, цоликлонами)
  29. Состав крови различных групп крови
  30. Стандартный метод
  31. Правила расшифровки результатов
  32. : Определение группы крови и резус-фактора
  33. Метод перекрестной реакции
  34. Определение группы крови цоликлонами
  35. Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»
  36. : Определения групп крови с помощью цоликлонов

Определение группы крови по системе АВО – важность процедуры и особенность методики

Определение группы крови по системе abo с помощью стандартных сывороток

Кровь человека – уникальная жидкость, объединяющая практически весь животный мир. Ее характеризуют и подразделяют по группам и резус-фактору. Как происходит определение группы крови по системе АВО? Каков алгоритм определения группы крови? Какой аппарат для этого применяется, и что требуется для проведения данной процедуры?

Особенности классификации

Чтобы понять, как определяются группы, важно разобраться, что такое наследование групп крови по системе АВО, и чем отличаются виды крови на молекулярном уровне.

На тип кровеносной жидкости не влияет:

  • возраст,
  • пол,
  • раса,
  • место проживания,
  • заболевания.

Групповые параметры крови не изменяется с течением времени и остается постоянной в течение всей жизни.

Группы крови отличаются содержанием разных агглютиногенов – элементов, расположенных на эритроцитарных клетках и агглютининов, которые присутствуют в плазме. У представителей одной группы присутствует один тип агглютиногена, у другой – других. В некоторых типах крови таких компонентов нет вообще.

Важно! Кровь – очень важная для организма жидкость. Она содержит 22 аутосомы от общего количества.

Агглютиногены бывают двух типов:

Ниже представлена таблица, описывающая их содержание в зависимости от группы:

  • первая группа – агглютиногенов нет,
  • вторая группа содержит агглютиногены А,
  • третья группа – агглютиногены В,
  • четвертая группа – агглютиногены А и В одновременно.

Учитывать группу крови и резус фактор жизненно необходимо при беременности, особенно, когда женщина резус-положительная, а мужчина – резус-отрицательный. В данном случае возникает иммунологическая несовместимость матери и плода, в результате чего последний отторгается.

Материнский организм реагирует на него, как  на чужеродное явление. В результате ребенок погибает, рождается недоношенным или получает гемолитическую болезнь новорожденных – состояние, требующее длительного и сложного лечения.

Такое явление происходит, если ребенок унаследовал положительный резус-фактор от отца, а мать резус-отрицательна. Однако при первой беременности изоиммунизация происходит далеко не всегда, поскольку антитела не успевают выработаться.

Еще этот фактор учитывают те, кто соглашается на переливание донорский крови. Иногда данную процедуру рекомендуют тем, кто перенес тяжелое кровотечение, например, при поражении крупной артерии, открытом переломе, тяжелых формах туберкулеза.

Донором называют того, кто сдает кровь для переливания ее другому человеку. Того, кто принимает этот биоматериал, называют реципиентом. Кровь с одинаковыми параметрами считается подходящей для донорства.

Почему нельзя ошибиться при исследовании

Нет механизма совмещения разных групп. Когда жидкости разных категорий смешиваются, происходит агглютинация, то есть процесс склеивания клеток между собой. Практически в 100% случаев результатом становится смерть пациента. В процессе агглютинации кровь слипается в комочки разных размеров. Циркуляция такой жидкости приводит к летальному исходу.

Люди с первой группой неспособны принимать иную кровь, кроме такой же. В ее составе нет никаких агглютиногенов, поэтому попадание этих веществ приводит к плаченым последствиям.

Агглютинация не происходит, когда к четвертой категории попадает кровь любого типа. В ней содержатся агглютиногены как А, так и В. Человек с четвертой группой крови считается идеальным реципиентом.

Почему важно точно определять резус-фактор

Однако важно не только определение группы крови по системе АВ0, но и выявление резус-фактора. Что это такое?

Резус-фактор – это генетическая особенность, не зависящая от человека. Тип крови закладывается еще при зачатии, он подразделяется на резус-положительный и резус-отрицательный. При развитии резус-конфликта организм матери вырабатывает антитела к биоматериалу ребенка, и происходит отторжение плода.

Подробнее о том, как наследуются типы кровеносной жидкости и резус-фактор, можно узнать, просмотрев видеосюжет:

Важно! Если при беременности возникнет резус-конфликт, это может закончиться летально для ребенка и вызвать осложнения в здоровье женщины.

Неважно, одноплодная беременность, или внутри женщины развиваются монозиготные близнецы. Процесс, вызванный резус-конфликтом, всегда приводит к печальным последствиям.

Определение группы крови по системе АВО важно проводить на ранних сроках беременности. Еще процедура показана тем, кто рискнул проводить переливание крови.

Процедура переливания крови, несовместимой по резус-фактору, приводит к гемолизу. В организме начинается распад эритроцитов. По сути, это иммунный ответ на проникновение в организм чужеродных клеток.

Выделяется гемолизин, то есть вещество, провоцирующее это разрушение. В итоге развивается тяжелая анемия. Если состояние вызвано переливанием, чаще всего процесс заканчивается летально.

Определение групп с помощью цоликлонов

Принцип определения группы крови цоликлонами заключается в несложной процедуре с использованием специальных реагентов. Антигенный и агглютининовый процесс достаточно яркий, чтобы сразу получить достоверную исчерпывающую информацию.

Важен порядок проведения данной манипуляции. Определение группы крови по системе АВ0 выполняется исключительно в лабораторных условиях. Для сохранения качества реагентов и самого биоматериала требуется охлаждение, которого невозможно достичь в домашних условиях.

Методика определения группы крови по системе АВО с помощью цоликлонов – пример современного способа диагностики и основа для будущих исследований и открытий. Процедуру можно проводить женщинам, ожидающим ребенка, независимо от того, какая неделя беременности протекает на данный момент.

Подготовка к манипуляциям

Как происходит наследование групп крови системы АВО, можно понять, если провести детальное изучение передачи физиологических признаков. Чтобы полученная характеристика крови была точной, требуется четко соблюдать все правила ее проведения. Обычно на такие манипуляции направляет врач-генетик. Исследование представляет собой анализ инвитро. Расшифровка необходима, ее тоже проводит врач.

Чтобы ни физиология, ни наследственность, ни стресс не сказались на результатах лабораторного исследования, важно четко соблюдать правила, как сдать такой анализа и условия, при которых он должен проводиться.

Чтобы правильно определить естественный генотип, важно соблюсти следующие условия:

  • в кабинете, где проводятся операции с реагентом, должна быть постоянная температура в диапазоне от 15-25 градусов,
  • все компоненты, используемые для определения системы групп крови, должны храниться в плотно закрытых банках,
  • чтобы стандартный метод исследования дал ясный результат, кабинет лаборатории должен быть хорошо освещен,
  • сыворотка и другие компоненты, используемые при процедуре, не должны содержать каких-то комков, или быть мутными.

Условия проведения процедуры могут быть соблюдены только в мед-учреждении. Требуется заранее подготовить инструменты, которые потребуются для определения типа в системе крови АВО:

  • специальные предметные стекла,
  • цоликлоны двух видов,
  • две разные пипетки,
  • стеклянные палочки для перемешивания реагентов,
  • шприц для манипуляций с кровью пациента,
  • вата,
  • стерильные салфетки,
  • спиртовой раствор,
  • жгут для манипуляций на венозных сосудах.

После того как все материалы и инструменты подготовлены к проведению процедуры, к ней можно приступить.

Проведение процедуры

Пациент, которому назначено переливание, или беременная женщина сдает кровь. Для этого забирают примерно 5 мл биоматериала. Такова норма для достоверного определения группы.

После этого на планшетку или специальную тарелку наносят по капле материала и по капле каждого реагента. Один реагент способен к агглютинации с антигенами, содержащимися во второй группе, а другой – к тем, что в третьей.

С помощью стеклянной палочки выполняется смешивание капли биоматериала с каждым реагентом в отдельности. Тот реагент, с которым произойдет агглютинация, и есть определитель группы крови. Этот нюанс имеет главное значение.

Такой множественный анализ расшифровывается так:

  • агглютинация реагента А – вторая группа,
  • агглютинация реагента В – третья группа,
  • агглютинация не произошла – первая группа,
  • агглютинация произошла с обоими реагентами – четвертая группа.

Важно! Если есть подозрение, что у человека четвертый тип, для достоверности образец проверяют на дополнительном анти-АВ цоликлоне.

Наглядно о проведении такого исследования в лаборатории рассказывается в видео:

Внимательный подход врача позволит точно определить группу и резус-фактор, что может сыграть важнейшую роль при планировании и вынашивании беременности. Так можно сохранить человеку жизнь и хорошее самочувствие, а некоторым парам подарить возможность иметь детей.

Загрузка…

Источник: https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/analiz-krovi/kak-opredelit-gruppu-krovi-cheloveka-po-sisteme-avo-sut-metoda-i-ego-vazhnost

Определение группы крови при помощи стандартных сывороток и цоликлонов

Определение группы крови по системе abo с помощью стандартных сывороток

Кровь обладает особыми иммуногенетическими свойствами, по которым всех людей можно разделить на определенные группы. Каждый человек обязан знать, к какой группе крови он принадлежит.

Это может понадобиться при оказании экстренной медицинской помощи, когда невозможно по какой-либо причине провести достоверное определение группы крови. Исследователями была подтверждена связь между группами крови и заболеваниям.

Определив свою группу крови, человек сможет узнать особенности своего здоровья и вовремя профилактировать болезни.

Групповую систему AB0 открыл миру Ландштейнер еще в 1900 году. Позже изучались другие различия крови человека и животных (например, резус-фактор).

Принадлежность к группе крови закреплена в генетическом коде, и наследуется с другими индивидуальными признаками. Формирование антигенного состава крови происходит во внутриутробном периоде, и он не изменяет свои специфические свойства всю жизнь человека.

Элементы кровяной системы

В жидкой подвижной плазме крови равномерно распределены клеточные элементы: эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. Форменные элементы занимают до 35-45% от общего объема крови.

Помимо этого в плазме находятся жировые частицы клеток, так называемая «кровяная пыль» (гемоконии). Эритроциты в крови могут содержать в своем составе специфические антигены (агглютиногены A и B). В плазме крови могут обнаруживаться антитела (агглютинины α и β).

Комбинации антигенов и антител позволяют классифицировать группы крови по системе AB0.

Варианты комбинации реакции агглютинации

Иные виды групповых систем крови избирают только присутствие антигенов в эритроцитах. Антитела к ним обычно появляются при вливании реципиенту неподходящей крови, иммунологической несовместимости группы крови беременной женщины и плода.

Согласно системе AB0 всех людей разделяют на такие группы:

  • Первая 0 (I) (1 группа крови) – в красных кровяных тельцах нет антигенов, а в сыворотке обнаруживаются агглютинины α и β
  • Вторая A (II) – содержит в своем составе агглютиноген A
  • Третья B (III) (3 группа крови) – присутствует агглютиноген B
  • Четвертая AB (IV) – вместе фиксируются эритроцитарные агглютиногены A и B.

Система AB0 дает возможность избежать опасных последствий при неправильном переливании крови. Для идеальной совместимости крови нужно, чтобы кровь донора соответствовала такой же группе в системе AB0, что и кровь пациента.

Переливание чужеродной группы крови может вызвать иммунологическую несовместимость и приведет к трансфузионным осложнениям.

Перед процедурой переливания крови обязательно изучают состав крови и проводят ряд анализов на совместимость.

Методы определения

В условиях современной медицины известно несколько методов, по которым возможно определить принадлежность крови к одной из групп:

  • диагностика с использованием цоликлона, который выступает в качестве индикатора;
  • методика перекрестной реакции;
  • эритротест;
  • метод стандартных сывороток.

Чаще находит место в исследованиях именно последний из перечисленных способов: использование сыворотки для определения группы крови.

Исследование крови с использованием методики стандартных сывороток

Лабораторные компоненты

Для определения типа группы крови пациенту не требуется специальной подготовки, необходимо лишь воздержаться от употребления алкоголя и не принимать никаких лекарственных средств накануне анализа.

В лабораторию берут с собой направление от врача. Хорошо заранее приобрести одноразовый набор для взятия крови или шприц – это надежно защитит от возможного инфицирования в процессе отбора проб. Забор крови делают из пальца или вены. У грудного ребенка кровь обычно берут из пятки.

В основе определения типа крови лежит реакция агглютинации, при этом образуются хлопья склеенных между собой эритроцитов. Набор для лабораторного исследования на группу крови включает стандартные сыворотки и эритроциты в виде раствора, контрольные реактивы, физиологический раствор (натрия хлорид 0,9 %-ный) и специальные белые пластинки из пластика или фарфора, пипетки.

Набор для лабораторного исследования крови

Для достоверного результата анализа крови, в лаборатории должна быть температура воздуха в пределах 21-24° C и яркое освещение. Все расходные компоненты обязательно проверяют на соответствие единой серии, срокам использования и условиям хранения. Недопустимо наличие взвеси, осадка, помутнения в растворах эритроцитов и сыворотке.

Определения группы крови с цоликлонами

Цоликлоны – это раствор моноклональных антител к антигенам, которые размещены на оболочке эритроцитов. Генная инженерия дала возможность синтезировать вещество в искусственно созданных условиях с использованием мышей. Животным вводят специальный антиген, а после из брюшной полости добывают скопившуюся жидкость, где находятся нужные антитела.

Цоликлоны для определения групп крови бывают трех типов: анти-А (красная жидкость), анти-В (синяя) и анти-D (прозрачная).

Кабинет исследователя нужно обеспечить хорошим освещением, а температуру поддерживать от 15 до 25°С выше ноля.

Нельзя брать для исследования цоликлоны с неплотно закрытой крышкой, потому что после испарения жидкости активность антител снижается. Если на дне флакона образовались хлопья, то такой реагент нужно заменить, иначе результат будет ложным.

Кровь чаще используется капиллярная, берут ее из пальца (около 5мл) непосредственно перед процедурой определения группы крови.

Реагенты смешивают на специальном белом планшете, где ячейки подписывают соответственно: А, В, D.

В каждую из них помещают каплю цоликлона (0,1мл) и рядом располагают капли крови (отдельной пипеткой для каждой ячейки) в соотношении 10:1.

За смешанными реагентами наблюдают около 3 минут, при этом немного покачивая планшет. Реакция агглютинации видна невооруженным глазом, а если ее нет, образуется однородная капля красного цвета.

Чтобы узнать резус-фактор, в ячейку с подписью D наносят каплю соответствующего реагента и немного меньше крови, если наблюдается агглютинация – кровь резус положительная, если осадок не образовался – резус-отрицательная.

Определение сыворотками

На белой пластинке отмечают по порядку названия групп крови 0, A, B. Большие капли стандартной сыворотки групп 0(I), A(II), B(III) наносят на пластину напротив ее надписи, а рядом сыворотки другой серии: получается два ряда капель.

Использование разных серий реагентов применяют для исключения ошибки. Каждую каплю стандартной сыворотки аккуратно смешивают с небольшой каплей крови пациента.

Все манипуляции выполняют пипеткой или палочкой из стекла. Затем пластину немного покачивают и оценивают результат исследования в каждой капле.

Если в течении пяти минут образуются хлопья из агглютинированных эритроцитов, результат принимают за положительный.

Для исключения возможной ошибки, каждую каплю крови на пластине смешивают с каплей физраствора и ожидают еще пять минут. Если хлопья начинают оседать во всех каплях, то проводят контроль реакции, путем смешивания исследуемой крови и стандартного раствора сыворотки группы AB(IV). В последнем случае склеивания эритроцитов не должно регистрироваться.

Пластина с сывороткой крови

Определение группы крови на основании полученных результатов:

  • Первая группа – ни в одной из капель не произошло склеивание эритроцитов
  • Вторая (2) группа крови – положительная реакция крови с сыворотками групп 0(I) и B(III)
  • Третья группа – агглютинация крови со стандартными сыворотками 0(I) и A(II)
  • Четвертая (4) группа крови – положительный результат в трех каплях и отрицательный с контрольной сывороткой AB(IV).

Существует перекрестный способ определения типа плазмы, при этом дополнительно используют стандартные эритроциты.

Этот способ определения группы крови помогает выявить плазменные групповые антител α и β и открывает более полную характеристику крови. Применяют перекрестный способ перед переливанием крови.

Отбор проб венозной крови проводят заранее, ее отстаивают и отделяют плазму от форменных элементов.

Иногда вместо стандартных сывороток, применяют растворы Цоликлон с моноклональными антителами. Получают их при участии технологий генной инженерии.

При определении группы крови цоликлонами, очень важен квалификационный уровень медицинского работника, его аккуратность и внимательность. Ошибочный результат могут спровоцировать неправильный порядок нанесения реактивов, использование загрязненных или мокрых пипеток, непригодных реагентов, пренебрежение контрольным исследованием.

Переливание крови

В медицинской практике встречается ряд заболевания, при которых жизнь пострадавшему можно спасти только путем переливания крови: острые кровопотери, инфекционные заболевания, шоковые состояния. Могут проводить переливание крови при низком гемоглобине.

Процедуру назначают при его значительном снижении (до 60г/л). Во время гемотрансфузии быстро увеличиваются содержание Hb, железа, и самочувствие больного значительно улучшается.

Но процесс переливания крови имеет много сложностей и это довольно опасная процедура, она должна проводится только в условиях стационара опытным трансфузиологом.

Человек, от которого берут кровь для трансфузии, называется донором, а тот, кто принимает кровь, является реципиентом. Во избежание осложнений во время трансфузии нужно перед процедурой тщательно исследовать кровь реципиента.

При переливании крови, совместимость проверяется трижды

Группа крови и резус фактор всегда определяются при госпитализации больного, нуждающегося в переливании крови. Гемотрансфузия несовместимой крови может закончиться летальным исходом. Поэтому перед началом переливания, кровь донора и реципиента неоднократно проверяют на групповую принадлежность, затем проводят индивидуальную и биологическую пробу на совместимость.

Во время индивидуальной пробы кровь донора и реципиента смешивают отдельно на планшете и наблюдают за ее состоянием. Если через 5 минут агглютинация не произошла можно переходить к пробам.

Следующий этап – биологическая проба, когда кровь вводят непосредственно пациенту. Сначала переливают примерно 10 мл крови и наблюдают за состоянием больного 3 минуты, если патологической реакции на трансфузию нет, снова повторно вводят 10 мл крови и ожидают 3 минуты. Повторяют процедуру три раза. Только после этого проводят гемотрансфузию.

Переливание в зависимости от групп

Таблица переливания крови по группам
Группа реципиентаГруппа донора
I (0)II (A)III (B)IV (AB)
I (0)+
II (A)++
III (B)++
IV (AB)++++
«-» агглютинация, кровь несовместима; «+» отсутствие агглютинации, переливание возможно.

I(0) группу крови можно переливать всем людям – человек с данной группой крови универсальный донор. Обладатели IV(AB) группы крови – универсальные реципиенты, могут принимать кровь от всех доноров.

Существуют станции переливания, где происходит забор крови, ее заготовка и переработка. Ценными донорами являются люди с IV группой – это самая редкая группа крови, определяется у 6% людей (еще реже определяется IV группа с отрицательным резусом). Самая распространённая группа крови — первая (у 40% жителей).

Обязательно при переливании крови и определении совместимости следует учитывать резусную принадлежность!

Как узнать группу крови? Сделать это можно в медицинских учреждениях, где врач, пользуясь специальными методиками, установит групповую принадлежность крови.

Может ли в течении жизни поменяться группа крови? Определенно нет. Группа крови закладывается на генетическом уровне, передается от родителей и поменяться в ходе жизнедеятельности не может.

Для определения группы используют в основном два способа: метод определения по стандартным сывороткам или с цоликлонами.

Редкость результатов

При анализе медицинских статистических данных оказывается, что наиболее распространена первая группа крови – до 65% всего населения Земли. За ней следуют вторая с результатом 25% и третья (около 8% населения). Самым редким результатом при определении групп крови остается четвертая группа, особенно с отрицательным резус-фактором.

Результаты определения группы крови регистрируются медицинским сотрудником, проводившим анализ, в амбулаторной карте или документе, удостоверяющем личность (паспорт). Обязательно вносится дата исследования и подпись ответственного медицинского работника.

Технические причины

  1. Некорректное расположение реагентов на планшете.
  2. Нарушение количественного отношения цоликлонов и эритроцитов.
  3. Недостаточная стерильность планшетов и пипеток.
  4. Неверная запись в историю болезни.
  5. Несоблюдение времени реакции агглютинации. В случае ожидания менее 5 минут реакция может не наступить при наличии слабых агглютиногенов. При передержанной реакции подсыхание капель с краев может симулировать ложноположительный результат.
  6. Температура воздуха свыше 25 °C. Рекомендуется использовать специальные реагенты с поправкой на температурные условия, опускать внешнюю часть планшета в холодную воду.
  7. Недостаточное или избыточное центрифугирование.

    В первом случае возможны ложноположительные результаты, во втором – ложноотрицательные.

Экспресс-методика

Данное тестирование крови дает возможность определить группу крови и ее резус фактор практически в любых домашних условиях. В экспресс-наборе имеется специальная карточка, в которой проделаны вмятины. Главное преимущество экспресс-теста — это скорость анализа и удобство при проведении. Результат исследования известен приблизительно по истечению пяти минут.

Экспресс-тест

Помимо стандартных антител, также применяется «анти-D». Он дает данные о резус- факторе пациента. Для данного анализа кровь подходит практически в любом виде. Специфические реагенты уже входят в состав экспресс-методики.

Перед переливанием или серьезным хирургическим вмешательством группа крови перепроверяется с целью абсолютной точности данных. Очень важна также индивидуальная совместимость человека, помимо групповой.

Источник: https://ukb1.ru/drugoe/gruppa-krovi-agglyutinaciya.html

Правила определения группы крови по системе АВО

Определение группы крови по системе abo с помощью стандартных сывороток

Процедура определения групп крови по системе АВО заключается в выявлении антигенов А и В в эритроцитах с помощью стандартных антител и использованием агглютининов в плазме или сыворотке анализируемой крови стандартными эритроцитами. Методика разработана в начале XX века и до сих пор активно применяется в медицине. Определение антигенов А и В осуществляется благодаря цоликлонам анти-А и анти-В.

Основные понятия

У доноров всегда определяются не только антигены в эритроцитах, но и агглютинины в сыворотке (плазме) с применением стандартных эритроцитов. В качестве биоматериала используется венозная кровь.

Перед исследованием необходимо отказаться от жирной пищи за сутки до анализа и не курить за полчаса до сдачи теста.

Группы крови определяют дважды: сначала в лечебном отделении, где заготавливается материал, а затем подтверждают исследованием в лаборатории.

Определение групп крови по системе АВО является основным тестом, который используется в трансфузиологии. Также подобная система групп крови есть у некоторых животных, например у шимпанзе, горилл и бонобо.

История открытия

В науке существует общепринятое мнение о том, что методика определения групп крови по системе АВО была выявлена впервые Карлом Ландштейнером, австрийским учёным, в 1900 году. Тогда он описал в своём труде три типа антигенов. За это через тридцать лет ему была присуждена Нобелевская премия по медицине и физиологии.

Из-за того, что между учёными раньше не было тесных связей, позже установили, что чешский врач-серолог Ян Янский независимо от изысканий К. Ландштейнера впервые описал четыре группы крови человека, но его исследования были не известны широкой аудитории. В настоящее время именно классификация, разработанная Я. Янским, применяется в России и республиках бывшего СССР.

В США У. Л. Мосс создал свою похожую работу в 1910 г.

Методика определения групп крови по системе АВО с помощью цоликлонов

Группа крови должна определяться в помещении с хорошим освещением с соблюдением диапазона температуры от 15 до 25 градусов Цельсия, так как отклонения от этой нормы могут повлиять на результаты исследования. На пластинке или тарелке пишутся инициалы и фамилия пациента.

Слева направо или по кругу наносят стандартные обозначения групп (О(I), A(II), В(III)). Под ними размещают по капле соответствующие сыворотки отдельными пипетками для каждого вида. Затем к ним добавляется кровь пациента. Материал для исследования берется из мочки уха или пальца.

Этого требует техника определения группы крови по системе АВО.

Правомерно также использование эритроцитов, находящихся в пробирке после того, как образовался сгусток. Нужно, чтобы количество сыворотки было больше количества добавленной крови в десять раз.

После этого капли перемешиваются стеклянными палочками (отдельно для каждой). В течение пяти минут, аккуратно покачивая пластинку, смотрят за появлением реакции гемагглютинации.

Она обнаруживается в том, что появляются маленькие красные комочки, сливающиеся затем в более крупные. Сыворотка в это время практически полностью теряет цвет.

Для того чтобы устранить ложную гемагглютинацию простого склеивания эритроцитов, нужно через три минуты добавить одну каплю физиологического раствора и проверить, сохраняется ли агглютинация. Если да, то она является истинной. Все, определение групп крови по системе АВО на этом завершено.

В результате могут наблюдаться четыре реакции:

  • не происходит агглютинация ни с одной из сывороток – первая группа О(I);
  • реакция проявилась с сыворотками I(ab) и III(a) – вторая группа А(II);
  • агглютинация наступает с сыворотками I(ab) и II(b) – третья группа В(III);
  • если реакция происходит с тремя сыворотками, нужно провести дополнительную процедуру с реактивами группы АВ(IV), которые являются стандартными; если агглютинация в такой капле отсутствует, можно считать, что это 4-я группа крови АВ(IV).

Экспресс-метод для резус-фактора

Методика определения групп крови по системе АВО предполагает одновременное выявление резус-фактора (Rh).

Поверхность пластинки предварительно смачивают и пишут на ней «контрольная сыворотка» и «сыворотка антирезус». Затем под надписями располагают одну-две капли нужных реактивов и добавляют к ним анализируемый материал.

Для этого также можно использовать кровь из пальца (в таком же количестве, как и объём сыворотки) или эритроциты, оставшиеся на дне пробирки после появления сгустка (половина объёма сыворотки). Выбор материала на конечный результат не влияет.

Затем кровь и сыворотка перемешиваются сухой стеклянной палочкой, после чего в течение пяти минут ожидают наступления реакции. Для того чтобы устранить ложные показания, через три-четыре минуты добавляют изотонический раствор натрия хлорида (всего несколько капель).

Определение группы крови по системе АВО и Rh проводится очень часто.

Если агглютинация эритроцитов в капле с сывороткой происходит, это указывает на положительный резус крови. По статистике Rh+ встречается у 85 % населения планеты.

Отсутствие её позволяет говорить о резус-отрицательной принадлежности. Если агглютинация появилась в контрольной сыворотке, значит она пришла в негодность.

К сожалению, алгоритм определения группы крови по системе АВО не всегда срабатывает идеально.

Какие ошибки могут быть допущены при данной методике?

Неточности при определении принадлежности крови той или иной группе зависят от следующих причин:

  • Технических.
  • Биологической специфики исследуемой крови.
  • Неполноценного характера стандартных сывороток и эритроцитов.

Технические ошибки

Возможные погрешности при определении группы крови системы АВО перекрестным способом:

  • Неправильно расположенные на пластинке сыворотки.
  • Неверные количественные пропорции материала.
  • Использование недостаточно чистых тарелок или пластинок, которые соприкасаются с кровью (каждая сыворотка должна набираться отдельной пипеткой, промывать которую нужно раствором хлорида натрия (в концентрации 0,9 %)).
  • Неверная запись анализируемого материала.
  • Несоблюдение времени, необходимого для наступления агглютинации, – спешить и учитывать реакцию до истечения пяти минут не следует, потому что в крови могут быть слабые агглютиногены. Передерживать также не стоит, потому что капли могут подсохнуть с краёв и привести к ложному заключению. Важно соблюдать правила определения группы крови по системе АВО.
  • Ошибочное центрифугирование тоже может привести к ложному результату.
  • Температура воздуха, превышающая допустимую, влияет на отсутствие агглютинации. Чтобы избежать ошибок подобного рода, нужно использовать специальную сыворотку, предназначенную для работы в жарком климате. Определять группы крови нужно на тарелке или пластинке, внешняя поверхность которых опускается в холодную воду.

Ошибки биологической специфики

Погрешности, связанные с биологической спецификой анализируемой крови, делятся на два типа.

  • Зависящие от особенностей эритроцитов.
  • Ошибки, обусловленные биологическими особенностями сыворотки.

Рассмотрим каждый вид более подробно.

Зависящие от особенностей эритроцитов

  • Поздняя агглютинация, объясняющаяся «слабыми» формами эритроцитов и антигенов. Для того чтобы избежать ошибок, определять группу крови доноров и реципиентов нужно с использованием стандартных эритроцитов. Индентифицировать агглютиноген А2 следует повторным исследованием с другими видами реагентов и другой посуды, увеличив время регистрации реакции.
  • «Панагглютинация» («аутоагглютинация») – умение крови проявлять одинаковую реакцию неспецифического характера со всеми сыворотками, в том числе с собственной. Через пять минут острота такой агглютинации слабеет, хотя должна усиливаться. Подобные случаи наблюдаются у онкобольных, обожжённых и др. В качестве контроля необходимо оценить проявление агглютинации анализируемых эритроцитов в стандартной сыворотке четвёртой группы и физрастворе. При «панагглютинации» группу крови определяют в результате тройного отмывания эритроцитов. Если оно не даёт нужного результата, стоит произвести повторный забор образца крови в согретую перед процедурой пробирку и поставить пробу в термоконтейнер, чтобы способствовать поддержанию температуры 37 градусов Цельсия и выше. Затем следует доставить в лабораторию, где сохраняется указанная выше температура и используются подогретые физиологический раствор, пластинка и реактивы.
  • Иногда эритроциты анализируемой крови располагаются как «монетные столбики», и их можно принять за агглютинаты. Если добавить две капли изотонического раствора и мягко покачать планшет, красные кровяные клетки занимают правильную позицию.
  • Неполная или смешанная агглютинация, встречающаяся у пациентов со второй, третьей и четвёртой группами в результате трансплантации костного мозга или в первые три месяца после переливания крови 0(I).
  • Во время рутинного тестирования в результате предыдущей сенсибилизации выявляются антитела иной специфичности. Нужно определить её и подобрать эритроциты без содержания антигена, к которому обнаружена иммунизация. Реципиенту нужно обязательно подбирать совместимую донорскую кровь индивидуально.
  • Отсутствуют антитела А и В, что наблюдается у новорожденных и больных, страдающих от угнетения гуморального иммунитета.
  • При образовании «монетных столбиков» аномальный результат нужно подтвердить, взяв стандартные эритроциты первой группы. Раствор хлорида натрия и покачивание планшета помогают дифференцировать настоящие агглютинаты и «монетные столбики».

Слабые сыворотки с прошедшим сроком годности или имеющие титр меньше 1:32 способны зарождать слабую и позднюю агглютинацию. Применение таких реактивов недопустимо.

Использование негодных стандартных эритроцитов или сывороток, приготовленных в нестерильных условиях и законсервированных в недостаточной степени, приводит к появлению «бактериальной» агглютинации, имеющей неспецифическую природу.

Существует множество популярных предположений о группах крови системы АВО, появившихся непосредственно после её обнаружения в разных мировых культурах. Так, например, в 30-е годы прошлого столетия в Японии и некоторых других странах получила популярность теория, связывающая группу крови с тем или иным типом личности. Подобные теории популярны и на сегодняшний день.

Есть также мнение, что человек, имеющий группу А, подвержен тяжёлому похмелью, О связана с хорошими зубами, а группа А2 – с самым высоким уровнем IQ. Но научно такие утверждения не доказаны.

Мы рассмотрели определение групп крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток.

Источник: https://FB.ru/article/334005/pravila-opredeleniya-gruppyi-krovi-po-sisteme-avo

Методы как определить группы крови (стандартными сыворотками, цоликлонами)

Определение группы крови по системе abo с помощью стандартных сывороток

В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность.

Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.

Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции.

Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур.

Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.

Состав крови различных групп крови

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

  • I (0) – ά, β — поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов,
  • II (А) – β — на поверхности имеется антиген А и антитело β,
  • III (В) – ά — поверхность содержит В с антителом типа ά,
  • IV (АВ) – 00 — поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Определение групп крови

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система — посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.

Разведение производится так:

  • В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
  • Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

  • На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
  • Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Правила расшифровки результатов

Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.

: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

  • Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы,
  • Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй,
  • При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III,
  • Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

Техника анализа перекрестным методом практически не имеет отличий от исследования с помощью сывороток, но присутствуют некоторые дополнения.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сывороткамиНаличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитамиГруппы крови
0(I)A(II)B(III)AB(IV)0(I)A(II)B(III)
++0(I)
+++A(II)
+++B(III)
+++AB(IV)

+ агглютинация,

– агглютинация отсутствует,

реакцию не проводят.

Перекрестный метод получил распространение за счет того, что он предотвращает диагностические ошибки, возникающие при применении стандартных методик.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Цоликлоны

Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.

Вид цоликлоновГруппа крови
Результат агглютинацииАнти-ААнти-В
0(I)
+A(II)
+B(III)
++AB(IV)

IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

  • Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0,
  • Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования,
  • Стеклянные палочки для перемешивания образцов,
  • Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

: Определения групп крови с помощью цоликлонов

Загрузка…

Источник: https://KardioBit.ru/krov/metody-opredeleniya-gruppy-krovi

Домашний доктор
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: